如何區(qū)别激發光光譜儀和(hé)熒光光譜儀?
點擊次數:2744 更新時(shí)間(jiān):2019-03-26
熒光光譜儀是一種定性、定量分析的儀器(qì)。通(tōng)過熒光光譜儀的檢測,可(kě)以獲得(de)物質的激發光譜、發射光譜、量子産率、熒光強度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性,以及熒光的淬滅方面的信息。是研究藥物與蛋白質相互作(zuò)用的常用儀器(qì)。藥物與蛋白質相互作(zuò)用後可(kě)能引起藥物自身熒光光譜和(hé)蛋白質自身熒光(內(nèi)源熒光)光譜以及同步熒光光譜的變化,如熒光強度和(hé)偏振度的改變、新熒光峰的出現等,這些(xiē)均可(kě)以提供藥物與蛋白質結合的信息。
如何區(qū)别激發光光譜儀和(hé)熒光光譜儀?熒光往往很(hěn)弱,如果不把它從激發光裏分離出來(lái),它會(huì)被激發光淹沒。熒光測量系統,通(tōng)常用以下一種或幾種方法來(lái)分離熒光:
1、90°布置法:激發光和(hé)探測器(qì)90°方向布置。由于熒光沒有(yǒu)方向性,它向四周發射,因此可(kě)以把探測器(qì)放在與激發光成90°的位置來(lái)接收熒光。大(dà)部分的熒光測量裝置都采用此方法(同時(shí)常常配上(shàng)其它方法)。
2、時(shí)間(jiān)延遲法:由産生(shēng)熒光的原理(lǐ)可(kě)知,熒光從産生(shēng)到消失,它有(yǒu)一個(gè)時(shí)間(jiān)過程(即從高(gāo)能級的非穩态躍遷到低(dī)能級的亞穩态或穩态的時(shí)間(jiān))。不同的物質,這個(gè)時(shí)間(jiān)的長短(duǎn)是不一樣的,它們從幾微秒(miǎo)到幾分鍾不等。我們可(kě)以給探測器(qì)的快門(mén)一個(gè)延遲時(shí)間(jiān),讓激發光消失後開(kāi)始對熒光采樣。在一些(xiē)特殊條件,如用反射探針測固體(tǐ)、液體(tǐ)的熒光時(shí),光路無法90°布置,這時(shí)需要通(tōng)過延遲采樣時(shí)間(jiān)來(lái)分離出熒光。
3、濾波法:從熒光光譜儀産生(shēng)原理(lǐ)可(kě)知,熒光的波長大(dà)于激發光的波長。我們在探測器(qì)前面放一個(gè)長通(tōng)濾波片,它的截至波長稍大(dà)于激發光波長。這樣,隻有(yǒu)熒光才能被探測器(qì)采集。該法的另一個(gè)好處是可(kě)以慮掉一部分雜散光,但(dàn)是它也可(kě)能慮掉一部分熒光。